MTT实验操作步骤详解

在生物学和医学研究中，MTT（甲基噻唑基四唑）实验是一种广泛应用于细胞活力检测的经典方法。通过MTT实验，研究人员能够快速评估细胞增殖、毒性或药物敏感性等重要指标。本文将详细介绍MTT实验的操作步骤，并辅以图文说明，帮助读者更好地理解和掌握这一技术。

实验原理

MTT实验的核心原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将无色的MTT还原为蓝紫色的甲臜结晶。这些结晶的量与活细胞的数量成正比，因此可以通过测定吸光度来间接反映细胞的存活情况。

实验材料准备

在开始实验之前，确保所有试剂和器材均已准备好：

- MTT溶液（通常为5mg/ml）

- PBS缓冲液

- DMSO（二甲基亚砜）

- 96孔板

- 酶标仪

- 细胞培养基

实验步骤

1. 细胞接种

将待测细胞以适当浓度接种于96孔板中，每孔加入100μl的细胞悬液。确保每个样品设置多个重复孔。

2. 孵育培养

将接种后的96孔板放入恒温培养箱中孵育，时间为24小时至72小时不等，具体时间取决于实验设计。

3. 加入MTT溶液

取出培养板，小心移除上清液，每孔加入20μl的MTT溶液。轻轻摇晃使MTT均匀分布，然后继续孵育4小时。

4. 溶解甲臜结晶

吸弃MTT溶液，每孔加入150μl的DMSO以溶解形成的甲臜结晶。用振荡器轻轻混匀，确保完全溶解。

5. 测定吸光度

使用酶标仪在570nm波长下测定各孔的吸光度值。根据标准曲线计算细胞存活率。

注意事项

- 操作过程中需注意无菌操作，避免污染。

- MTT溶液应现配现用，避免长时间暴露于光线下。

- 不同类型的细胞可能需要调整孵育时间和MTT浓度。

通过以上步骤，您可以顺利完成MTT实验并获得可靠的数据结果。希望本文的图文详解能为您提供清晰的操作指导！

如需进一步补充更多细节或图示，请随时告知！